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凯氏定氮法测定骨胶原肽中蛋白质含量

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仪器与试剂仪器
K1160全自动凯氏定氮仪,SH420F石墨消解仪
试剂
硫酸(分析纯),硼酸(分析纯),氧化钠(分析纯),溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,催化剂片(3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片),0.1mol/L盐酸标准滴定液。

实验方法取样
取0.2g左右样品,加催化剂一片(或硫酸钾3g与硫酸铜0.2g),再沿瓶壁滴加硫酸10.0ml。
消解
利用石墨消解炉进行消解,将消化管放在石墨炉上,盖上排气罩,连接废气吸收系统,消化完毕后,将消化管取下冷却至室温。消化过程采用曲线升温模式,设置参数如下:

温度(℃) 时间(min)
1 240 15
2 420 60

上机测试
待消化管内溶液冷却至室温后,将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下:

硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量
25ML 30ML 35ML 5min 99.99%

实验结果仪器自动滴定并计算,计算公式如下

式中:c-标准酸摩尔浓度(mol/L)
W-样品质量(g)
V0-空白样滴定标准酸消耗量(mL)
V-样品滴定标准酸消耗量(mL),准确到小数点后四位

编号 取样量(g) 蛋白质含量(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.2030 98.059 98.243 0.31
2 0.2006 98.597
3 0.2028 98.072

结论通过数据可知,利用全自动凯氏定氮法测定骨胶原肽粉中的蛋白质含量平行性良好,且具有操作简单,安全性高,节省人力等优点。

参考文献[1]GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定[S].

注意事项样品中蛋白含量较高,取样及消解时应注意减少误差。可以用称量纸包裹住样品投入消化管中,以防止样品粘在消化管上部。实验过程中浓酸浓碱较为危险,请小心操作。

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